蛋白质免疫印迹(Western Blot )作为最基础分子实验,是每一位实验小白必修技能。western Blot有以下范围应用:
(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;
(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;
(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。
下面小编供上的是Abcam经典Western Blot protocol,包括样品准备、凝胶电泳、凝胶到膜的转移以及检测蛋白的免疫染色,帮助初学者简单明了的get 到你所做的western 是怎样的 western。
Western Blot操作步骤多,每一步的失误都会造成全盘失败,综合而言,抗体仍然是决定成败的关键。其中内参抗体很重要,因为内参抗体的选择关系到全盘实验的考评。Actin,Tubulin,GAPDH都为最常用的内参抗体,Actin,Tubulin的缺点是有时候会出现复带,GAPDH与前两者相比比较稳定,建议选择。实验顺顺利利的前提是注意每一个环节,步步为营,祝君顺利!
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